Kedves Olvasóim!
A nyár végeztével és az oktatási időszak kezdetével sok izgalmas, új feladat vár rám mind az oktatás, mind pedig a kutatás terén :)
Ebben a hónapban a "Magyary pályázatomhoz" kapcsolódóan a fehérje tirozin nitrációról, mint lehetséges poszttranszlációs módosításról ejtek szót.
A fehérje nitráció egy nitrogén-monoxid és reakciótermékei (=reaktív nitrogénformák, angol rövidítés RNS) által katalizált poszttranszlációs módosítás állatokban és növényekben egyaránt. A tirozin aminosav aromás gyűrűjében levő két ortho helyzetű szénatom közül az egyikhez egy nitro-csoport (-NO2) kapcsolódik (lásd ábra).
az ábra forrása (az eredeti ábra módosítva)
A tirozin aminosav nitrálódása módosítja a fehérje aktivitását mivel a nitro-csoport beépülése az aromás gyűrűbe csökkenti a fenol csoport pKa értékét (10,1 -->7,2), ami befolyásolja a tirozin elektron-átadási reakciókban való részvételének képességét és a fehérje konformációt kialakító képességét is.
A tirozin nitráció háromféleképpen befolyásolhatja a fehérjék működését: (1) fokozza a fehérje aktivitását, (2) nem befolyásolja az aktivitást, (3) csökkenti a fehérje aktivitását (ez a leggyakoribb).
Ezek mellett fontos az is, hogy a tirozin nitrálódása megakadályozza annak a foszforilálódását, így alapvetően befolyásolhat jelátviteli utakat.
A tirozin nitráció kimutatása lehetséges immunológiai módszerrel (pl. Western blot, immunofluoreszcencia), 3-nitrotirozin elleni antitesttel. A pályázatom keretében a fehérje nitráció mértékét terveztem kimutatni a Brassica fajok gyökerében és hajtásában cink terhelés hatására.
Az eredményekből látszik, hogy 7 fehérjesáv adott nitrotirozin-pozitív immunoreakciót a Brassica fajok gyökerében kontroll körülmények között. Ez azt jelenti, hogy stressz-mentes állapotban is nitrálódnak fehérjék, vagyis egy alapvető, poszttranszlációs szabályozási mód ez a növényi sejtekben.
A cink stressz hatására a kontrollban is megfigyelt 7 fehérjesáv adott reakciót (új sávok nem jelentek meg), de az immunoreakció erőssége kifejezettebb volt. Ez arra utal, hogy a fehérje pool nagyobb hányada szenved nitrációt a cink stressz hatására.
Alább a Western blot analízis eredményei láthatóak 7 napos, 300 mikroM koncentrációjú cink kezelés esetén a két Brassica faj gyökerében. A piros nyilak a reakciót adó fehérjesávokat jelölik. A pozitív kontroll a nitrált marha szérum albumin (NO2-BSA) volt, ami a 3-nitrotirozin elleni antitesttel erőteljes immunoreakciót adott.
saját eredmény és fotó
Vagyis összességében elmondható, hogy a pályázat keretében végzett munka során sikerült a tirozin nitráció kimutatása a cink-kezelt Brassica növényekben. :) HAPPY END :)
Ez a bejegyzés kissé tudományosra sikerült, de remélem, hogy érdekesnek találták!
Következő hónapban újra jelentkezem!
